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如何选择层析填料                                                                                                                                           
●五大类层析方法  1.尺寸排阻(SEC)                   2.离子交换(IEX)                   3.亲和层析(AFC)
                  4.疏水层析(HIC)
                  5.反相层析(RPC) ●介质—颗粒越细、大小越均匀,分辨率越高,但反压亦较高。 ●物理稳定性—能承受高流速,同时保持柱床体积和结构稳定,省去了每次重新装柱的流程,提高重复性。 ●化学稳定性—能承受极端pH,高盐,利于开发分离条件和在线清洗(CIP),大大延长介质寿命和提高重复性。

若对目标蛋白或者样品不大了解,可以尝试以下方法: ●使用分离范围宽广的凝胶过滤介质,依据分子量将样品分成不同组分。
●用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白,一步即可得到高纯度样品;也可以用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质。
●体积大的样品,往往使用离子交换层析来浓缩和粗纯化;高盐洗脱的样品再用疏水层析纯化。
●疏水层析用高盐吸附、低盐洗脱的原理,洗脱的样品又可直接上离子交换介质;两种方法常被交替使用。 对体积不同的柱子来说,体积流速不能直接用作比较,一般都换算成线性流速,再做比较:



检测装柱效果一般用<0.5%~30μm介质)或<2%~90μm介质)柱体积的1%丙酮测试柱效和峰形。

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